| 应用材料:
NK-92细胞株的基因编辑工作,包括:细胞电转、细胞单克隆、单克隆细胞高密度扩增。
| 实验材料:
NK-92细胞株(自有高克隆株), Cyto-NK92细胞培养基;
| 实验步骤:(简述)
1) 复苏NK-92细胞株,并按照1×10^6/mL密度接种传代,按照细胞密度每3天传代一次。
2) 第3代后,显微镜下观察细胞形态后,补加1倍体积培养基,准备用于电转。
3) 取出3×10^6细胞用于电转,重悬与培养基和携带有GFP的载体中,电击后接种与新鲜的培养基,并观察记录细胞的形态。
4) 第二天补充一倍的新鲜培养基,并测定细胞荧光比例。
5) 第三天,将NK-92细胞分散,并重悬与特定的克隆培养基中用于单克隆形成。
6) 第9~12天可以获得NK-92的单克隆细胞,将单克隆用于扩增。
7) 将扩增的单克隆细胞用于检测目的基因表达或者基因的功能的编辑。
8) 整个过程结束,将细胞冻存。
| 电转过程:
| 克隆过程:
| 细胞扩增: