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1) 用移液管将下层的血细胞与生理盐水 1:1 混匀，按 2:1（血细胞悬液：Ficoll）将血细胞悬液缓慢加入装有 Ficoll 的离心管。
注意
| ① Ficoll推荐品牌：GE（Catalog No.：17-1440-02）。 ② Ficoll在使用前应先放置常温回温。 ③ 滴加用生理盐水混合后的血细胞悬液时，需要注意控制好滴加速度，不要扰乱液面分界，保持液面分层明显；如果因操作失误导致血细胞悬液混入Ficoll层，则先停止滴加，因与Ficoll层密度不同，待悬液层慢慢上浮分层后，再继续滴加。 |
2) 将离心机升降速调至最低，400×g 离心30 min；
3) 离心结束后，用移液管吸取中间白膜层置于新的50 mL离心管，并加入40 mL生理盐水350×g 离心10 min洗涤两次，以去除血小板等杂质。
注意 | 提取的PBMC最后一次洗涤可以用40 mL NK细胞扩增无血清培养基重悬后离心，以提高细胞的活力。 |
备注：如果需要使用机采，如果红细胞较多需要使用Ficoll分离。
