外周血和脐带血中的单核细胞的冻存后如何维持细胞的活力？特别是其中的NK细胞的活力? 一直是NK细胞激活扩增和其他免疫细胞的临床研究的一个难题。
Cyto-NK™ PBMC快速冻存液——是顶点生物为PBMC冻存专研一种快速批量使用的冻存液，专门针对外周血液单核细胞（PBMC）中的免疫细胞和NK细胞的特点研发，能降低冻存过程对NK细胞的损伤，维持其中各种细胞比例不变，特别是其中NK细胞复苏率，实现PBMC细胞高存活率的冻存复苏。
产品使用方便，无需特殊设备和仪器，无需程序降温，重悬细胞后直接置于-80°C冰箱即可完成冻存。
所有成分纯度高、化学特性稳定均为医药辅料，产品配方无蛋白，可避免蛋白的污染，适合于免疫细胞和NK细胞应用。
| “PBMC专研快速冻存液”细胞冻存步骤:
1. 收集PBMC细胞或分离的白膜层细胞于离心管中。
2. 按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的大小计算所需冻存细胞数（参考数量：5×10^5~1×10^7 cells/mL）。
3. 离心收集细胞。（参考离心温度：4℃）。
4. 收集培养细胞沉淀，彻底弃去离心管中的上清。
5. 加入4℃预冷适量的Cyto-NK™ PBMC快速冻存液于离心管中。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。
6. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管或者冻存袋中，建议每管1mL或1.5mL，或者按照冻存袋要求操作。
7. 立即将冻存管直接置于-80℃冰箱中完成“快速”冻存操作，24小时后移入液氮或者-80℃长期保存。
注意： 冻存细胞管或者袋子直接不要紧密贴合放置，应该间隔放置，以免影响细胞的降温。
| PBMC冻存复苏低密度激活扩增NK细胞测试结果
一、NK细胞复苏扩增测试实验
目的：验证肝素钠采血后冻存PBMC，复苏扩增NK细胞的操作流程
二、材料：
PBMC来源：肝素采血冻存（Cyto-NK™快速冻存液）
培养基：Cyto-NK™试剂盒（CHUNK-9006C），复苏培养基；
添加物：血小板裂解物 (或者血清、热灭活血浆）；
三、操作步骤：
1. 先在工作台里面准备复苏培养基（室温），按照1：8（冻存液体积：复苏培养基体积）将复苏培养基加入15ml离心管中；并准备一个T75培养瓶，加入10~15ml复苏培养基，放入培养箱预热；
2. 37℃水浴锅复苏细胞，在1min内完全融解；
3. 将解冻后的细胞悬液加入到含复苏培养基的离心管中管中，温柔混合静置1min后，离心去除上清；
4. 使用复苏培养基重悬，放入提前准备好的T75培养瓶中，培养箱内孵育30min；
5. 再次离心去除上清，使用激活完全培养基进行重悬，按照正常过程进行培养。
注意： 激活后由于冻存的细胞增殖速度较慢，所以离心去除培养液后要按照1x10^6/ml的密度进行重悬接种。
四、结果分析：
细胞激活：使用Cyto-NK™快速冻存液（无蛋白无血清冻存液），5x10^6/ml密度进行冻存；
Cyto-NK™快速冻存液冻存PBMC 复苏后2天
2. 细胞扩增：
Cyto-NK™快速冻存液冻存PBMC 复苏后14天
3. 流式数据：NK细胞85.54%
